鸭大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

摘要：本试验对重庆市万州区某养鸭专业户发病鸭分离的细菌经培养特性及生化试验，鉴定为大肠杆菌。用临床上常用的18种抗菌素纸片对分离菌株进行药敏试验。结果表明，所分离的大肠杆菌对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感，对先锋噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感，而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性。

关键词：鸭；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

Separation,IdentificationandMedicineSensitiveTestofEscherichiacolifromDuck

Abstract:onestrainofEscherichiacoliisolatedfromduckinwanzhouwasidentifiedbyculturalcharacterandbiochemistrytest.Andthemedicinesensitivetestof18antibioticshowedthatthestrainsisolatedwerehighsensitivetoNitrofurantoin,AmikacinandFuraxone，mid-sensitivetoCeforan, andGentamycinwhilenonsensitivetoTetracycline，Ciprofloxacinetcetera.

Keywords:Duck；Escherichiacoli；isolationandidentification；MedicineSensitiveTest

鸭大肠杆菌病是鸭的常发病，常混合或继发于其他疾病，发病鸭多以败血症为主，主要病理变化表现为心包炎、肝周炎、气囊炎。近年来，随着我国畜牧业的发展，兽医临床上抗菌药物被广泛应用，导致大肠杆菌耐药不断增加，治疗效果下降。许多养殖户往往凭经验甚至是乱用药，不仅疗效差，且容易造成耐药性和药物残留。因此，对当地分离的大肠杆菌菌株进行抗生素的敏感试验很有必要。笔者对重庆市万州区某养殖场送检的病死鸭进行细菌分离鉴定及药敏试验，并提供临床指导有效控制了该鸭场大肠杆菌病。现报道如下：

1材料与方法

1.1材料

1.1.1病料来源

2009年5月  重庆市万州区养殖户送检的病死鸭。

1.1.2培养基的制备

麦康凯琼脂购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号：20040317。各种糖及MR、VP、吲哚试验、枸橼酸盐利用试验和硫化氢试验微量发酵管，购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号：20030622。营养肉汤、VP试剂等参考文献配置[1]。

1.1.3试验动物

9日龄雏鸭10只，购自万州某养鸭专业户，饲养3天后用于作动物致病性试验。

1.1.4药敏纸片

药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号：20070114。

1.2方法

1.2.1病理剖检

病理剖检可见纤维素性心包炎，心包膜明显增厚，其上沉着白色或黄色纤维素性附着物。肝脏肿大，表面膜附着纤维素性样物。

1.2.2细菌的分离培养和镜检

无菌取病送检病鸭肝脏、心血接种于营养肉汤培养基，37℃增菌培养24h。然后将培养物在麦康凯琼脂平板上划线接种，37℃培养24h，观察细菌的培养特性，革兰氏染色结果。再钩取典型菌落接种鲜血琼脂斜面37℃培养24h，4℃保存。

1.2.3细菌的生化试验

参考文献[1]进行细菌生化试验。

1.2.5致病性试验

取分离菌接种营养肉汤，37℃培养18小时。将10只雏鸭分为两组，每组5只，第一组为于皮下接种注射纯培养物0.2mL/只(约含细菌0.6亿/只)，第二组注射灭菌肉汤0.2mL/只。接种24小时后观察试验动物的发病及死亡情况。

1.2.6细菌的药敏试验

取细菌纯培养物密集划线接种于整个普通琼脂平板上，将药敏片依次均匀贴放到平板上。每个平板放5片，各纸片中心相距约24mm，纸片距平板边缘约15mm，各纸片间距离相等。将平板倒置于37℃温箱培养24小时，然后观察药物的抑菌情况，并测定各种药物抑菌圈的大小。

2试验结果

2.1培养特性及镜检结果

细菌在普通肉汤中均生长良好，均匀混浊，管底有灰白色沉淀，轻摇呈云雾状；在麦康凯琼脂培养基上生长出周围粉红色，中心深红色的菌落。该菌经革兰氏染色可见红色中等大小，两端钝圆的球杆菌，多单个散在排列。

2.2生化试验结果

该细菌能够发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气；发酵蔗糖，不产气；吲哚试验和MR试验阳性；VP试验、柠檬酸盐利用试验、硫化氢试验和尿素分解试验为阴性（见表1）。结合培养特性及镜检结果，鉴定为大肠杆菌。

表1             分离菌株的生化试验结果

Table1    Thebiochemistrytestresultofseparatedstrain 

注：糖发酵试验中，“⊕”表示产酸产气，“+”表示产酸不产气；其余试验中“+”表示阳性结果，“-”表示阴性结果。

2.3致病性试验结果

雏鸭在细菌接种后24小时内死亡4只，而剩下的在48小时后也死亡。剖检发现雏鸭有肝周炎，心包积液，心包膜有轻微的纤维素性渗出等病变。从死亡雏鸭的肝脏和心血中，分离到了大肠杆菌。而对照组无异常表现。

2.4药物敏感试验结果

所分离菌株对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感，对先锋噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感，而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性（见表2）。

表2                分离的大肠杆菌药敏试验结果

Table2        Thesusceptibilitytestresultofseparatedstrain

注：判定标准：敏感度按《抗菌药药物药敏试验判断标准》(由中国药品生物制品鉴定所，卫生部抗菌药物细菌耐药性检测中心制定)进行判断，抑菌圈直径大于15mm者为高敏药物；直径为10－15mm者为中敏药物；直径为10mm以下者为耐药。

3分析讨论

3.1根据分离菌的培养特性、染色特点及生化试验结果，所分离的细菌鉴定为大肠杆菌。经动物试验表明该分离菌株有较强的致病性。

3.2大肠杆菌病是一种常发病，但是却难于控制，这不仅因为其血清型多，各血清型间无交叉保护性，而且不同血清型对药物的敏感性不一致[2，3]。不同地区的大肠杆菌对药物敏感性也各不一致[4，5]。本次药敏试验结果表明分离菌对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感，对先锋噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感，而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性，表明当地鸭大肠杆菌分离株对常见的药物均有较强的耐药性。

由于大肠杆菌极易产生耐药性，且介导其产生耐药的质粒具有遗传性。所以一般不建议采用抗生素低剂量长期预防用药，临床最好使用经实验筛选的敏感性药物治疗剂量作治疗性用药，病愈后应及时停止使用以防耐药性的产生[6，7]。此外，使用高敏药物时，应按说明给药，避免超量和滥用，每个疗程应在4d以上较好。当畜主按照药敏试验结果使用了高敏药物呋喃妥因5d后，病情得到了很好的控制。

3.3大肠杆菌为一种条件性致病菌，鸭发大肠杆菌病除了环境卫生条件差外，还与饲养密度、混群饲养、种蛋污染的因素有关[5]。为减少此病发生，应搞好鸭舍清洁卫生，勤扫粪便，定期消毒，做好通风作，饲喂优质饲料及清洁水，采用全进全出饲养方式，减少各种不良应激。

参考文献：

[1]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业出版社，2002

[2]刘柱江，赵来兵．鸭大肠杆菌油佐剂灭活苗的研制[J]．中国家禽，2002，24(8)：25-26

[3]高松，刘秀梵，张如宽，等．我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J]．畜牧兽医学报，1999，30(2)：l64-l71

[4]黄瑜，李文杨．番鸭大肠杆菌病的诊治[J]．中国兽医杂志，2000，26(12)：34-35

[5]程方俊，周廷宣，田晋红，等.重庆养鸭场雏鸭大肠杆菌分离鉴定及药敏试验[J].西南农业大学学报，2006，28（6）：1107-1110

[6]刘永松，韦兵，汤社护，等.产蛋鸭大肠杆菌疾病的诊治及结果分析[J].中国动物检疫,2007,24(l2):33

[7]周作勇，胡世君，王芝英，等.鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].西南师范大学学报（自然科学版），2009，34（6）：159-161